- Josephine (Jo): (También conocida como Joane, Joanne y Giovanna en traducciones italianas). Es la segunda de las mujercitas, una apasionada de la escritura, habilidad que desarrolla a medida que transcurre la historia. Tiene quince años y es la más independiente y audaz de las hermanas, aborrece las características femeninas que la limitan y rehúsa adaptarse a los estereotipos de cómo deberían actuar las mujeres. De carácter fuerte, irónico, sarcástico y malhablado, tiene encontronazos con Amy. Junto a su hermana Beth, ayuda a las personas más desfavorecidas de su comunidad. La relación con Beth es más estrecha que con las otras dos hermanas, Meg y Amy. Jo se corta el cabello, su más preciado bien, para obtener dinero y que su madre pueda visitar al padre herido durante la Guerra de Secesión (1861-1865). No acepta casarse con su mejor amigo, Theodore Laurence (Laurie) y años después, cuando ya es una mujer que trabaja por cuenta propia, se casa con el profesor Bhaer, de origen alemán, quien la estimula a seguir escribiendo y desarrollar su intelecto.
- Margaret (Meg): La mayor de las hermanas March. Tiene dieciséis años. Es hermosa, con cabello suave, de manos pequeñas y blancas de las que está orgullosa. Es la más responsable y ayuda a la Sra. March en las tareas del hogar. Cuida a la hermana pequeña, Amy, de los enojos de Jo. Trabaja también como institutriz con las familias de Concord. Se enamora de John Brooke, tutor de Laurie, su vecino. Se casa con él y tiene gemelos: Margaret (Daisy) y John (Demi apócope por Demi-John).
- Amy: La menor de las hermanas, con doce años. Tiene talento para la pintura. Es la más bella de las March, con cabellera dorada y ojos azules. Muy vanidosa y en continuo conflicto con su hermana Jo. Viaja a Europa una larga temporada. Se casa con Laurie y tienen una hija, Bess.
- Elizabeth (Beth): La tercera de las hijas del Dr. March. Tiene trece años y es una tímida. Le gusta tocar el piano. Se dedica a ayudar a los necesitados de Concord, por lo que contrae la escarlatina cuando su madre se encuentra junto al esposo herido en Washington.
- Theodore (Laurie o Teddy): Un joven encantador, travieso y rico, que vive al lado de la familia March en compañía de su abuelo sobreprotector. Tiene quince años y es a menudo malentendido por el abuelo, que lo ama pero teme que siga los pasos de su padre. Este último fue un joven de espíritu libre que se fugó con su amada, una pianista italiana, fue repudiado por ello y murió temprano a causa de una enfermedad. La abuela y la tía de Laurie también fallecieron, esta última muy joven. Laurie es el único sobreviviente de la pequeña familia, y es enviado a vivir con el Sr. Laurence. Jo rechaza su propuesta de matrimonio; se casa con Amy y tienen una hija.
- Margaret March (Marmee o Señora March): La madre de las chicas. Cuida la casa mientras su marido no está. Se involucra en trabajos caritativos e intenta guiar la moral de las mujercitas, modelando su conducta. Se convierte en una madre para Laurie.
- Robert March: Padre de las chicas y esposo de Margaret March. Había sido rico, se presupone que ayudó a amigos poco escrupulosos que no repararon su deuda, lo que ocasionó la pobreza de la familia. Fue un gran académico y párroco, sirve como capellán para el Ejército de la Unión. En algunos libros también es médico.
- James Laurence: Vecino rico de la familia March. Solitario, vive recluido en su mansión y aunque lo intenta, a veces no sabe cómo comunicarse con su entusiasta nieto, Laurie. Laurence disfruta siendo benefactor de los March, ya que admira su caridad y entrega. Desarrolla una cálida amistad con Beth, que le recuerda a su hija fallecida.
- Hannah Mullet: La criada de la familia March, una mujer mayor, amable y leal.
- Tía March: Una viuda rica. Reside sola en su mansión y Jo trabaja con ella en calidad de lectora retribuida. Es tía del Sr. March y desaprueba el trabajo caritativo de la familia y su pérdida de riqueza. Amy es enviada a hacerle compañía cuando Beth está enferma; aunque al principio expresa su disgusto, su ocupación allí le hace bien a la chica. Es quien financia el viaje de Amy a Europa y cuando fallece, le deja de herencia a Jo la casa de Plumfield.
- Profesor Friedrich "Fritz" Bhaer: Un inmigrante alemán, pobre e intelectual que era un reconocido profesor en Berlín, pero ante la enfermedad terminal de su única hermana, le promete a esta criar a sus dos sobrinos en Estados Unidos, ya que es la patria del padre de los niños, ya fallecido. Por ello el profesor vive en la casa de la Sra. Kirke, donde se gana la vida dando clases particulares. Él y Jo se hacen amigos, critica su trabajo y la incentiva a convertirse en una escritora seria en vez de escribir historias sensacionalistas para tabloides semanales. Ambos terminan casándose y tienen dos hijos.
- John Brooke: Tutor de Laurie que se enamora de Meg, quien duda antes de aceptarlo, hasta que la tía March le prohíbe a la joven hacerlo, bajo amenaza de desheredarla, y descubre que está también enamorada de Brooke. Él sirve en el Ejército de la Unión hasta fines de 1861, y se casa con Meg tras la guerra. Rechaza los ofrecimientos del señor Laurence de ayudarle con dinero y se coloca como contable de libros en una casa comercial. Muere joven, cuando sus hijos tienen alrededor de diez años.
- Franz y Emil: Los dos sobrinos del Sr. Bhaer, de quienes cuida tras la muerte de su hermana.
- Señorita Norton: Una inquilina de mediana edad, con mucho dinero, que vive en la casa de la Sra. Kirke. Agasaja a Jo con disimulo, pidiéndole que la acompañe al teatro y la ópera.
- Sra. Kirke: Una amiga de la señora March, que posee una casa de huéspedes en Nueva York. Contrata a Jo por un tiempo como institutriz para sus dos hijas, Kitty y Minnie.
- Los King: Familia que contrata a Meg como institutriz.
- Los Hummell: Familia pobre de inmigrantes franceses. La señora March y sus hijas, aunque pobres, intentan ayudarles. Su bebé muere de escarlatina, y mientras lo cuidaba, Beth se contagia.
- Los Gardiner: Amigos ricos de Meg. Antes de que los March perdieran su riqueza, las dos familias eran de igual nivel social. Los Gardiner son retratados como gente de buen corazón pero envanecidos y cuya creencia sobre el matrimonio giraba en torno al dinero y la posición. La amiga de Meg, Sallie Gardiner, se casa con Ned Moffat, joven de buena familia que trató de pretender a Meg, sin que ésta lo aceptara.
- Tía y tío Carrol: Hermana y cuñado del Sr. March. Amy viaja a Europa con ellos y su hija Florence.
- Los Vaughn: Familia británica, amigos ricos de Laurie, simpatizan con las March. Son cuatro: Kate, la mayor, los gemelos Fred y Frank, y Grace, la pequeña. Son mucho más ricos que los Laurence. Uno de ellos, Fred, le propone matrimonio a Amy, pero ella lo rechaza.
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