Lope de Vega, en el encabezado de la obra escribe: Hablan en ella las personas siguientes, y debajo sigue este «dramatis personae», por orden de intervención:[g]
- Fernán Gómez de Guzmán (Comendador Mayor de la Orden de Calatrava)
- Ortuño (criado del comendador)
- Flores (criado del comendador)
- El Maestre de Calatrava (Rodrigo Téllez Girón)
- Pascuala (labradora)
- Laurencia (labradora)
- Mengo (labrador gracioso)
- Barrildo (labrador)
- Frondoso (labrador)
- Juan Rojo (labrador)
- Esteban (alcalde)
- Alonso (alcalde)
- Rey Don Fernando
- Reina Doña Isabel
- Don Manrique
- (Dos regidores de Ciudad Real)
- Un regidor (de Fuente Ovejuna)
- Cimbranos (soldado)
- Jacinta (labradora)
- Un muchacho
- Algunos labradores
- Un juez
- La música (orquesta de músicos)