Gilgamesh
Protagonista del poema. Rey tirano de Uruk. Se le atribuye, además, haber construido la ciudad. En la mayoría de las traducciones se lo describe como dos tercios dios y un tercio humano. Es sumamente fuerte y tiene un físico imponente. Su madre es la diosa Ninsunna. Su padre es Lugalbanda, quien también fue rey de Uruk.
Enkidu
Hijo de la diosa Aruru. Gemelo de Gilgamesh. Fuerte e imponente como él. Es concebido para que enfrente a Gilgamesh y termine con su tiranía. Enkidu vive como un salvaje, en la estepa, hasta que va a Uruk y conoce a Gilgamesh. En lugar de enfrentarlo, se convierte en su amigo entrañable.
Shamhat
Prostituta del templo. Es enviada a la estepa para atraer a Enkidu, conducirlo a Uruk y enfrentarlo con Gilgamesh.
Humbaba
Un gigante. Guardián del bosque de los cedros. Es derrotado y asesinado por Gilgamesh y Enkidu.
Ishtar
Diosa del amor, la fertilidad y la guerra. Hija de Anu. Posee un carácter iracundo. Es, según Gilgamesh, promiscua. Por eso, el protagonista la rechaza cuando ella intenta que él sea su amante. Para vengarse de Gilgamesh, Ishtar envía al Toro del Cielo a la Tierra causando cientos de muertes. Luego, exige a los dioses una mayor venganza. Esta exigencia será cumplida por los dioses, quienes matarán a Enkidu.
Anu
Dios superior de los sumerios. Padre de Ishtar. La ayuda a vengarse de Gilgamesh, decretando la enfermedad y muerte de Enkidu.
Urshanabi
Barquero que conduce a Gilgamesh sobre las aguas de los muertos hasta los confines de la tierra, en donde vive Utnapishtim.
Utnapishtim
Sabio. La diosa Ea le indica que construya un barco antes del diluvio y la inundación de Shurrupak. Luego, la diosa le concede la inmortalidad por haberlo hecho correctamente. Gilgamesh lo busca para que lo ayude a ser inmortal. Utnapishtim le indica dónde hay una planta que le otorgaría tal don. Este personaje es relacionado por los especialistas con Noé, el personaje bíblico, ya que el diluvio relatado en ambos textos es sumamente similar.
Siduri
Vendedora de cerveza con la que Gilgamesh se encuentra en su viaje al inframundo. Siduri es sumamente terrenal. Le aconseja a Gilgamesh que olvide su intención de volverse inmortal y disfrute la vida, aunque, finalmente, lo dirige al barquero Urshanabi.
Samas
Dios de la luz y el sol. Ayuda a Enkidu y Gilgamesh a derrotar al gigante Humbaba.